GRK 2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400558-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRK 2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRK 2 Double Nickase Plasmid (h) e il GRK 2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRK 2 Antibody (C-9): sc-13143
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRK 2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400558-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRK 2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400558-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRK2 (chinasi 2 dei recettori accoppiati a proteina G), codificata dal gene umano **GRK2**, è una chinasi serina/treonina che fosforila i GPCR attivati per avviare il reclutamento di **β-arrestina**, la desensibilizzazione del recettore, l’internalizzazione e la riprogrammazione della segnalazione. Regolando ampiezza e durata della segnalazione dei GPCR, GRK2 influenza le vie a valle **cAMP/PKA**, **MAPK/ERK** e **PI3K-AKT**, modulando risposte cellulari quali chemiotassi, proliferazione e segnalazione da stress. GRK2 interagisce anche con substrati e nodi di segnalazione non GPCR, collegando il traffico recettoriale a un controllo più ampio della dinamica del citoscheletro e della trasduzione del segnale. Un’espressione o un’attività deregolata di GRK2 è stata associata ad alterazioni della segnalazione β-adrenergica e dei recettori delle chemochine ed è oggetto di studio in contesti che includono rimodellamento cardiovascolare, disfunzione metabolica, infiammazione e reti di segnalazione correlate al cancro.
GRK 2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.