GRIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421837

概要

Ncoa2 は、GRIP-1（グルココルチコイド受容体相互作用タンパク質1）をコードしており、リガンド結合型受容体をクロマチン修飾複合体および基本転写装置へ橋渡しすることで、ホルモン依存的な転写を協調的に制御する核内受容体コアクチベーターである。マウス細胞において GRIP-1 は、グルココルチコイド、エストロゲン、アンドロゲン、甲状腺ホルモン、レチノイン酸受容体経路などを含むステロイドホルモンシグナル伝達ネットワーク内で機能し、発生、代謝、免疫応答、細胞分化を制御する遺伝子プログラムに影響を与える。SRC/p160 コアクチベーターファミリーの一員として、GRIP-1 はヒストンアセチルトランスフェラーゼやメディエーター関連因子との相互作用を介してシグナルを統合し、エンハンサーおよびプロモーター活性を調節する。核内受容体コアクチベーションの破綻や、NCOA2 ファミリータンパク質が関与する転写制御の変化は、異常な増殖や細胞系譜プログラムと関連づけられており、Ncoa2 は疾患関連モデルにおける転写制御機構の研究に有用な標的となる。

GRIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNcoa2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ncoa2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ncoa2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRIP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRIP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ncoa2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRIP-1の機能に不可欠なNcoa2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ncoa2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGRIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ncoa2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRIP-1 HDRプラスミド（m）および GRIP-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNcoa2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNcoa2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。