Grim19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403264

概要

NDUFA13（GRIM19）は、ミトコンドリア複合体Iの保存性の高い補助サブユニットをコードしており、酸化的リン酸化および呼吸鎖における適切な電子伝達を支えます。Grim19はミトコンドリア膜電位と細胞のエネルギー代謝の維持に寄与し、ミトコンドリア代謝をレドックス恒常性やアポトーシス感受性と結び付けます。さらに、複合体Iの組み立てと機能における役割に加えて、GRIM19はSTAT3依存的転写などのシグナル伝達プログラムと相互作用すると報告されており、ミトコンドリアの状態と核内遺伝子発現制御をつなぐ接点を提供します。NDUFA13/Grim19の制御異常はミトコンドリア機能障害の表現型と関連しており、呼吸の変化やストレスシグナルが疾患関連の細胞状態に寄与する状況で研究されています。

Grim19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNDUFA13遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NDUFA13内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NDUFA13のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Grim19タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Grim19シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NDUFA13欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Grim19の機能に不可欠なNDUFA13エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NDUFA13ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Grim19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGrim19 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NDUFA13遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Grim19 HDRプラスミド（h）および Grim19 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNDUFA13ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNDUFA13標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。