GRHL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408284-ACT

GRHL2（grainyhead-like transcription factor 2）は、配列特異的にDNAへ結合するヒトの転写因子であり、細胞間接着、極性、細胞骨格に関わる遺伝子プログラムを制御することで、上皮系譜の規定、分化、そしてバリア形成を調節します。接着や細胞運動性に関連する転写回路を調整することにより、上皮間葉転換（EMT）および関連するシグナル伝達ネットワークにも影響を及ぼし、組織の形態形成と恒常性の維持を形作ります。GRHL2活性の異常は、がん生物学や発生異常で観察される上皮の可塑性変化や転写リプログラミングと関連しており、上皮状態の制御を研究するうえで有用な結節点となります。GRHL2を中心とした制御は、創傷修復、オルガノイドの成熟、ならびにストレス下で上皮の完全性を維持する機構のモデルにおいても重要です。

GRHL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GRHL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GRHL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GRHL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGRHL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GRHL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGRHL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGRHL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGRHL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGRHL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。