Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPT2: sc-403739-ACT

La GPT2 humaine (glutamate-pyruvate transaminase 2 ; alanine aminotransférase mitochondriale) catalyse la transamination réversible entre l’alanine et l’α-cétoglutarate pour produire du pyruvate et du glutamate, reliant ainsi le métabolisme des acides aminés aux flux de carbone mitochondriaux. En soutenant l’anaplérose et la gestion du glutamate, GPT2 contribue à l’équilibre de l’azote et à l’homéostasie énergétique, en influençant des voies liées au cycle de l’AC (TCA) et à l’état rédox. Des altérations de l’activité de GPT2 ont été étudiées dans des contextes de reprogrammation métabolique et de dysfonction mitochondriale, où des changements dans l’interconversion alanine–pyruvate peuvent affecter la prolifération cellulaire et les réponses au stress. En tant qu’enzyme mitochondriale, GPT2 est également pertinente pour l’étude du métabolisme spécifique des tissus et des programmes d’utilisation des nutriments.

GPT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.