GPRC6A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403492-ACT

GPRC6Aは、栄養素のセンシングや内分泌‐代謝クロストークに関与するとされるクラスCのGタンパク質共役型受容体（GPCR）をコードしており、塩基性アミノ酸や二価陽イオンなどの細胞外シグナルに応答します。ヘテロ三量体Gタンパク質との共役を介して、GPRC6Aはセカンドメッセンジャーシグナルや下流のキナーゼ経路を調節し、細胞代謝、ホルモン分泌、炎症トーンに影響を及ぼし得ます。これまでに、糖代謝恒常性、エネルギーバランス、骨‐内分泌シグナル伝達などの文脈で研究されており、受容体依存的なシグナルが代謝および骨格生物学と結び付くことが示唆されています。GPRC6Aの発現やシグナル伝達の変化は、肥満、2型糖尿病、心代謝関連形質に関わる複雑な疾患表現型と関連付けて報告されており、機序解明を目的とした経路研究での利用を支持しています。

GPRC6A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPRC6Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPRC6A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPRC6A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPRC6A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPRC6Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPRC6A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPRC6A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPRC6A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPRC6A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。