GPR92 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-436329

概要

Lpar5は、Gタンパク質共役受容体GPR92（LPA5とも呼ばれる）をコードしており、リゾホスファチジン酸（LPA）に応答して細胞内シグナル伝達のダイナミクスを調節する脂質感知受容体です。マウス細胞では、GPR92はヘテロ三量体Gタンパク質と共役し、cAMP/PKA経路やRhoファミリーGTPaseによる細胞骨格リモデリングなどの経路を調節することで、接着、遊走、受容体近傍での炎症性シグナル伝達に影響を与えます。Lpar5の活性は免疫細胞の挙動やバリア関連応答と関連づけられており、脂質メディエーターの生物学を組織炎症や微小環境からのシグナルと結び付けます。したがって、LPA–GPR92シグナルの制御異常は、臨床的な転帰を示唆するものではないものの、免疫学、がん生物学、線維化に伴うリモデリングの機序研究において重要です。

GPR92 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLpar5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lpar5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lpar5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR92タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR92シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lpar5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPR92の機能に不可欠なLpar5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lpar5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPR92 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGPR92 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lpar5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPR92 HDRプラスミド（m）および GPR92 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLpar5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLpar5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。