Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR92 (m): sc-436329

Présentation

Lpar5 code pour le récepteur couplé aux protéines G GPR92 (également appelé LPA5), un récepteur sensible aux lipides qui répond à l’acide lysophosphatidique (LPA) afin de réguler la dynamique de la signalisation intracellulaire. Dans les cellules de souris, GPR92 s’associe à des protéines G hétérotrimériques pour moduler des voies telles que l’AMPc/PKA et le remodelage du cytosquelette piloté par les GTPases de la famille Rho, influençant l’adhésion, la migration et la signalisation inflammatoire proximale au récepteur. L’activité de Lpar5 a été associée au comportement des cellules immunitaires et à des réponses liées aux barrières, reliant la biologie des médiateurs lipidiques à l’inflammation tissulaire et aux signaux du microenvironnement. Une signalisation LPA–GPR92 dérégulée est donc pertinente pour des études mécanistiques en immunologie, en biologie du cancer et dans le remodelage associé à la fibrose, sans pour autant impliquer de résultats cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR92 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lpar5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lpar5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lpar5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR92.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lpar5 pour l'étude de la signalisation de GPR92, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lpar5 essentiels à la fonction de GPR92
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lpar5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR92 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GPR92 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lpar5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR92 plasmide HDR (m) et le GPR92 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lpar5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lpar5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.