GPR54 Double Nickase Plasmid (h): sc-403766-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR54 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR54 Double-Nickase-Plasmid (h) und GPR54 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KISS1R abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR54 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403766-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR54 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403766-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KISS1R kodiert den G-Protein-gekoppelten Rezeptor GPR54 (auch als KISS1R bekannt), einen hochaffinen Rezeptor für Kisspeptine, der die Aktivität von GnRH-Neuronen reguliert und metabolische sowie entwicklungsbedingte Signale mit der Aktivierung der hypothalamisch-hypophysär-gonadalen Achse verknüpft. Nach Ligandenbindung signalisiert GPR54 hauptsächlich über Gαq/11 und stimuliert dadurch die Phospholipase C, die intrazelluläre Mobilisierung von Ca²⁺ sowie nachgeschaltete Aktivität des MAPK/ERK-Signalwegs, was die Genexpression und die neuroendokrine Sekretion beeinflusst. Eine veränderte KISS1R-Signalgebung wird mit reproduktionsendokrinen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter hypogonadotroper Hypogonadismus und Störungen des Pubertätszeitpunkts, und sie wurde in verschiedenen Modellsystemen hinsichtlich möglicher Rollen in Programmen der Zellmigration und -invasion untersucht. Diese Eigenschaften machen KISS1R zu einem nützlichen Ziel, um GPCR-vermittelte Calcium-Signalgebung, neuroendokrine Regulation und Crosstalk zwischen Signalwegen in humanen Zellen zu untersuchen.
GPR54 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KISS1R-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KISS1R abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KISS1R-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KISS1R-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.