Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR50: sc-402934-ACT

GPR50 codifica un receptor huérfano acoplado a proteínas G (GPCR) estrechamente relacionado con los receptores de melatonina y con expresión enriquecida en tejidos neuroendocrinos, donde se le implica en la regulación de la fisiología circadiana y metabólica. Aunque no se une a la melatonina con alta afinidad, GPR50 puede modular la señalización de los GPCR mediante interacciones y tráfico de receptores, influyendo en vías de segundos mensajeros que determinan la excitabilidad neuronal y las respuestas hormonales. Se han descrito asociaciones que vinculan variaciones de GPR50 o cambios en su expresión con trastornos del estado de ánimo, fenotipos del sueño y estacionales, y rasgos metabólicos, lo que respalda su relevancia para la investigación del SNC y del equilibrio energético. Como proteína de membrana con características de receptor, GPR50 también se utiliza para estudiar la evolución de los GPCR, la dimerización de receptores y la señalización dependiente del contexto en modelos de células humanas.

GPR50 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPR50 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR50 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPR50 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPR50, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR50. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPR50 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR50 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR50 en células tumorales con expresión de GPR50 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.