GPR43 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401858-ACT

FFAR2は、腸内細菌の代謝によって産生される酢酸・プロピオン酸・酪酸などの短鎖脂肪酸を感知するGPCRである短鎖脂肪酸受容体GPR43をコードしています。活性化されると、GPR43は主にGi/oおよびGqシグナルに共役し、cAMPや細胞内カルシウムフラックス、下流のMAPK経路を調節することで、白血球の走化性、サイトカイン産生、上皮バリア応答を形成します。この受容体は粘膜表面および脂肪組織における免疫・代謝のクロストークに関与し、栄養利用可能性を炎症トーンに結び付けます。FFAR2/GPR43シグナルの変化は炎症性疾患や代謝異常と関連していることが報告されており、宿主—マイクロバイオーム相互作用や自然免疫経路を研究するうえで重要です。

GPR43 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FFAR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR43 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FFAR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFFAR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR43の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFFAR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR43依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFFAR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR43経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。