GPR41 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402190

概要

FFAR3は、微生物発酵によって産生される酢酸、プロピオン酸、酪酸などの短鎖脂肪酸（SCFA）を感知する細胞表面受容体であるGタンパク質共役受容体GPR41をコードします。リガンドが結合すると、GPR41は主としてGi/oシグナルに共役し、cAMPを低下させるとともに、状況依存的に細胞代謝、分泌プログラム、炎症トーンに影響する下流経路を調節します。FFAR3の活性は、宿主―マイクロバイオーム間コミュニケーション、エネルギーバランスの制御、ならびに神経内分泌および免疫シグナル伝達ネットワークと関連づけられています。FFAR3/GPR41シグナルの変調は代謝性疾患や炎症性疾患の生物学において研究されており、臨床的な転帰を示唆するものではないものの、脂肪蓄積、インスリン感受性、サイトカイン関連応答に影響し得ると考えられています。

GPR41 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFFAR3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FFAR3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FFAR3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR41タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR41シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FFAR3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPR41の機能に不可欠なFFAR3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FFAR3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPR41 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPR41 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FFAR3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPR41 HDRプラスミド（h）および GPR41 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFFAR3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFFAR3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。