GPR120 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401362-ACT

FFAR4 kodiert GPR120, einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor zur Erkennung langkettiger Fettsäuren, der an Gαq/11‑ und β‑Arrestin‑abhängige Signalwege koppelt und dadurch die intrazelluläre Calciumdynamik sowie transkriptionelle Programme moduliert. In Stoffwechselgeweben und Immunzellen beeinflusst GPR120 die Lipidwahrnehmung, inflammatorische Signalübertragung und insulinsensitivierende Signalwege und verknüpft damit die Nährstoffverfügbarkeit mit zellulären Stressantworten und der Zytokinproduktion. Zu den berichteten nachgeschalteten Prozessen zählen die Regulation der MAPK/ERK‑Signalgebung, NF‑κB‑assoziierte Entzündungskaskaden und adipogene Differenzierungsprogramme. Eine Fehlregulation der FFAR4/GPR120‑Aktivität wurde mit adipositasassoziierten metabolischen Phänotypen, Insulinresistenz und chronisch entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien in Adipozyten, Makrophagen und Epithelmodellen motiviert.

GPR120 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FFAR4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR120 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FFAR4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FFAR4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR120-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FFAR4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR120-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR120-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FFAR4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.