GPR120 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401362-ACT

FFAR4 codifica o GPR120, um receptor acoplado à proteína G (GPCR) sensor de ácidos graxos de cadeia longa, que se acopla à sinalização dependente de Gαq/11 e de β-arrestina para modular a dinâmica do cálcio intracelular e programas transcricionais. Em tecidos metabólicos e células imunes, o GPR120 influencia a detecção de lipídios, a sinalização inflamatória e vias que aumentam a sensibilidade à insulina, conectando a disponibilidade de nutrientes às respostas celulares ao estresse e à produção de citocinas. Processos a jusante descritos incluem a regulação da sinalização MAPK/ERK, cascatas inflamatórias associadas ao NF-κB e programas de diferenciação adipogênica. A atividade desregulada de FFAR4/GPR120 tem sido associada a fenótipos metabólicos relacionados à obesidade, resistência à insulina e estados inflamatórios crônicos, o que motiva estudos mecanísticos em adipócitos, macrófagos e modelos epiteliais.

GPR120 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FFAR4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR120 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FFAR4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FFAR4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR120. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FFAR4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR120 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR120 em células tumorais com expressão de FFAR4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.