Partículas Lentivirales de Activación (h) GPR116: sc-408424-LAC

ADGRF5 codifica el receptor de adhesión acoplado a proteína G GPR116, un receptor de membrana implicado en programas de señalización célula–célula y célula–matriz que moldean la homeostasis epitelial y endotelial. Como aGPCR, GPR116 puede acoplarse a proteínas G heterotriméricas para influir en la señalización de segundos mensajeros y en la dinámica del citoesqueleto, con funciones descritas en la regulación de las propiedades de barrera, el tono inflamatorio y la remodelación tisular. En el pulmón, GPR116 se ha vinculado con la regulación del surfactante y la estabilidad alveolar, conectando la actividad del receptor con vías que controlan el manejo de lípidos y la función epitelial. Se ha observado una expresión alterada de ADGRF5/GPR116 en contextos relevantes para la inflamación y la biología del cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar fenotipos impulsados por GPCR en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GPR116 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ADGRF5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GPR116 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ADGRF5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GPR116. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ADGRF5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.