GPIHBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403473-ACT

GPIHBP1 (proteína 1 de ligação a lipoproteína de alta densidade ancorada por glicosilfosfatidilinositol) é uma proteína ancorada por GPI na superfície de células endoteliais que captura a lipoproteína lipase (LPL) e a transporta para o lúmen capilar, permitindo a hidrólise intravascular de lipoproteínas ricas em triglicerídeos. Por meio da sua ligação à LPL e de interações com quilomícrons e VLDL, a GPIHBP1 é central na via de lipólise e na regulação da depuração de triglicerídeos plasmáticos. Alterações na expressão ou na função de GPIHBP1 perturbam a localização e a atividade da LPL, contribuindo para fenótipos de dislipidemia caracterizados por hipertrigliceridemia e defeitos no manejo de lipídios. Portanto, este gene é amplamente estudado no metabolismo lipídico vascular, na biologia endotelial e nos mecanismos que governam o processamento de lipoproteínas.

GPIHBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPIHBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPIHBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPIHBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPIHBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPIHBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPIHBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPIHBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPIHBP1 em células tumorais com expressão de GPIHBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.