Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plásmido Doble Nickase (h) GPI: sc-402796-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GPI consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GPI (h) y el plásmido de doble nickasa GPI (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GPI. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GPI Anticuerpo (H-10): sc-365066
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GPI | sc-402796-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GPI | sc-402796-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La isomerasa de glucosa-6-fosfato (GPI) es una enzima citosólica que cataliza la interconversión reversible entre glucosa-6-fosfato y fructosa-6-fosfato, conectando la glucólisis y la gluconeogénesis e influyendo en el balance energético celular. Al modular el flujo de carbono a través del metabolismo central, la GPI puede afectar la homeostasis redox y la disponibilidad de precursores biosintéticos en células proliferativas y adaptadas al estrés. Más allá de su función enzimática canónica, se ha implicado a la GPI en actividades de señalización extracelular que pueden modular la motilidad celular y las interacciones con el microambiente, según el contexto. La alteración genética o funcional de la GPI se asocia con desregulación metabólica y se ha estudiado en relación con anemia y fenotipos del neurodesarrollo, así como con características metabólicas observadas en modelos de cáncer.
GPI El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPI en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPI. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPI. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPI alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.