GP49B CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420634-ACT

マウスのLilrb4aはGP49Bをコードしており、GP49Bは免疫グロブリンスーパーファミリーに属する抑制性受容体で、肥満細胞やマクロファージを含む骨髄系細胞に主として発現します。GP49Bは細胞質内にITIMモチーフを持ち、SHP-1/2などのホスファターゼをリクルートすることで、Fc受容体およびインテグリンに連動したシグナル伝達カスケードを減衰させ、カルシウム流入、脱顆粒、サイトカイン放出、ならびに貪食活性化を抑制します。自然免疫のチェックポイントを調節することにより、Lilrb4aはバリア組織および造血系コンパートメントにおける炎症の基調、抗原提示、組織リモデリングのプログラムに影響を及ぼします。したがって、GP49Bシグナルの破綻は、免疫恒常性、アレルギー性炎症、ならびに骨髄系細胞が駆動する病態について、マウスモデルで機序を解明する研究において重要です。

GP49B CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Lilrb4aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GP49B CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Lilrb4a 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLilrb4a転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GP49Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLilrb4a遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGP49B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLilrb4a発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGP49B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。