GnT-IVA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407146-ACT

O MGAT4A humano codifica a N-acetilglucosaminiltransferase IVa (GnT-IVA), uma glicosiltransferase residente no Golgi que adiciona ramificações de N-acetilglucosamina ligadas por β1,4 a N-glicanos complexos. Essa etapa enzimática contribui para a ramificação de N-glicanos, que pode modular o dobramento e o tráfego de proteínas, o tempo de permanência de receptores na superfície celular e a dinâmica de sinalização a jusante. A glicosilação dependente de MGAT4A se integra a redes mais amplas de biossíntese de glicanos que influenciam interações célula–célula, sensoriamento de nutrientes e a regulação de receptores de membrana. A N-glicosilação desregulada e padrões de ramificação alterados envolvendo MGAT4A têm sido estudados em contextos de disfunção metabólica e glicofenótipos associados ao câncer, sustentando seu uso em pesquisas de vias mecanísticas e descoberta de biomarcadores.

GnT-IVA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MGAT4A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GnT-IVA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MGAT4A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MGAT4A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GnT-IVA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MGAT4A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GnT-IVA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GnT-IVA em células tumorais com expressão de MGAT4A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.