GnT-II CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407393

概要

MGAT2は、N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼII（GnT-II）をコードしており、これはゴルジ体中間部（medial Golgi）に局在する糖転移酵素である。GnT-IIは、二本鎖（biantennary）構造のα1,6-マンノース側鎖に対して、β1,2結合でGlcNAcを付加することで、複合型N-グリカン合成の重要な段階を触媒する。この活性は、受容体輸送、細胞間接着、増殖因子シグナル伝達を担う糖タンパク質の成熟に影響し、その結果として膜タンパク質のプロテオスタシスや細胞外での相互作用の在り方を規定する。MGAT2依存的なN-グリカンの分岐や組成の変化は、がんに関連する文脈においてシグナル伝達の異常や細胞の遊走・浸潤性の変化と関連づけられており、さらにゴルジ体でのプロセシング不全を伴う先天性糖鎖付加異常症（CDG）とも関連している。そのため、MGAT2は、糖タンパク質プロテオミクス、分泌経路の生物学、ならびにN-グリカンリモデリングの経路レベル解析で頻繁に研究対象となっている。

GnT-II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMGAT2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MGAT2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MGAT2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GnT-IIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GnT-IIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MGAT2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GnT-IIの機能に不可欠なMGAT2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MGAT2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GnT-II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGnT-II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MGAT2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GnT-II HDRプラスミド（h）および GnT-II HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMGAT2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMGAT2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。