Plasmide CRISPR d'Activation (m) GMF-γ: sc-425658-ACT

Gmfg code le facteur de maturation gliale gamma (GMF-γ), une protéine régulatrice de l’actine enrichie dans les cellules hématopoïétiques, qui module le remodelage du cytosquelette, les changements de forme cellulaire et la migration directionnelle. GMF-γ influence la dynamique de l’actine dépendante d’Arp2/3 et est impliquée dans des processus tels que la chimiotaxie des leucocytes, l’adhésion et des événements de signalisation coordonnant le trafic des cellules inflammatoires et immunitaires. Dans des modèles murins et des cellules immunitaires primaires, une activité altérée de GMF-γ a été associée à un comportement dérégulé des cellules myéloïdes et lymphoïdes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des voies impliquées dans l’inflammation et les réponses tissulaires médiées par l’immunité. Ces caractéristiques font de GMF-γ un nœud utile pour disséquer la signalisation associée à la migration et l’homéostasie des réseaux d’actine en recherche biomédicale.

GMF-γ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gmfg sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GMF-γ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gmfg dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gmfg, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GMF-γ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gmfg natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GMF-γ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GMF-γ dans les cellules tumorales présentant une expression de Gmfg silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.