GMF-β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425657

Descripción general

El factor de maduración glial beta (GMF-β), codificado por el gen murino *Gmfb*, es un regulador citosólico conservado de la remodelación del citoesqueleto de actina que influye en los cambios de forma celular y en la motilidad en contextos neurales y relacionados con el sistema inmunitario. GMF-β interactúa con el complejo Arp2/3 para modular la dinámica de las ramificaciones de actina, lo que lo vincula a vías que gobiernan el crecimiento de neuritas, la remodelación sináptica y las respuestas de las células gliales a señales del entorno. En el sistema nervioso central, GMF-β se ha estudiado en relación con la señalización neuroinflamatoria y con programas de activación celular asociados al estrés, en los que una regulación alterada del citoesqueleto puede afectar la homeostasis tisular. Los procesos desregulados asociados a GMF-β son relevantes en modelos experimentales de neurodegeneración y de lesión inflamatoria por sus efectos sobre la migración celular, la gliosis reactiva y la señalización dependiente del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GMF-β (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gmfb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gmfb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gmfb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GMF-β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gmfb para la investigación de la señalización de GMF-β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Gmfb críticos para la función de GMF-β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gmfb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GMF-β CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GMF-β CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gmfb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GMF-β (m) y el plásmido HDR GMF-β (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gmfb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gmfb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.