GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420474
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- GM2/GD2 synthase Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im GM2/GD2 synthase-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GM2/GD2 Synthase: sc-376505
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-420474 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
B4galnt1 kodiert die GM2/GD2-Synthase, eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die N‑Acetylgalactosamin auf Gangliosid-Vorstufen überträgt und dadurch GM2 und GD2 erzeugt, wodurch sie die Zusammensetzung der Glycosphingolipide in Zellmembranen mitprägt. Durch die Kontrolle der Gangliosidmenge beeinflusst sie die Organisation von Lipid Rafts, Zell‑Zell‑Interaktionen und Signalprozesse, die für die neuronale Entwicklung und synaptische Funktion wichtig sind. In Mausgeweben trägt die B4galnt1-Aktivität zu myelinassoziierten Glykolipidmustern und zur neuroimmunologischen Homöostase bei, indem sie glykolipidvermittelte Erkennungsereignisse reguliert. Eine Fehlregulation der Gangliosidbiosynthese ist mit neurologischen Phänotypen und veränderten Zelloberflächen-Antigenlandschaften verknüpft, was B4galnt1 zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien in der Neurobiologie und Membranbiologie macht.
Das GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des B4galnt1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des B4galnt1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von B4galnt1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GM2/GD2 synthase-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von B4galnt1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GM2/GD2 synthase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf B4galnt1-Exone abzielen, die für die GM2/GD2 synthase-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere B4galnt1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des B4galnt1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GM2/GD2 synthase HDR-Plasmid (m) und GM2/GD2 synthase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von B4galnt1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten B4galnt1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.