Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-420474
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在GM2/GD2 synthase基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：GM2/GD2 Synthase: sc-376505，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-420474 | 20 µg | $397.00 |
概述
B4galnt1 编码 GM2/GD2 合成酶，这是一种定位于高尔基体的糖基转移酶，可将 N-乙酰半乳糖胺转移到神经节苷脂前体上，从而生成 GM2 和 GD2，并塑造细胞膜中糖鞘脂的组成。通过调控神经节苷脂的丰度，它影响脂筏的组织、细胞—细胞相互作用以及对神经元发育和突触功能至关重要的信号传导过程。在小鼠组织中，B4galnt1 的活性通过调节由糖脂介导的识别事件，参与髓鞘相关糖脂模式的形成并维持神经免疫稳态。神经节苷脂生物合成失调与神经系统表型以及细胞表面抗原谱的改变相关，因此 B4galnt1 是神经生物学与膜生物学机制研究中的关键靶点。
GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中B4galnt1基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对B4galnt1基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏B4galnt1开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使GM2/GD2 synthase蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建B4galnt1缺失的细胞模型，用于GM2/GD2 synthase信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 GM2/GD2 synthase 功能至关重要的 B4galnt1 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 B4galnt1 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 B4galnt1 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 GM2/GD2 synthase HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 GM2/GD2 synthase HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由B4galnt1同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定B4galnt1靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。