GlyT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403077-ACT

ヒトSLC6A5は、グリシントランスポーター2（GlyT2）をコードしている。GlyT2はシナプス前終末に存在するNa⁺/Cl⁻依存性トランスポーターであり、抑制性のグリシン作動性ニューロンへの高親和性グリシン再取り込みを担う。小胞内グリシン供給を維持し、シナプスにおけるグリシン利用可能性を調節することで、GlyT2は神経伝達物質のリサイクル、脊髄および脳幹の抑制性回路、ならびに運動・感覚処理の全体的な調節において中心的な役割を果たす。SLC6A5の機能は、溶質キャリア輸送、イオン共役膜輸送、シナプス伝達といった経路と結びつき、神経細胞の興奮性に影響を与える。GlyT2の活性や発現の変化は抑制性神経伝達の破綻と関連し、遺伝性の驚愕反応表現型やその他の運動制御障害に関する研究において重要である。

GlyT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC6A5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GlyT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC6A5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC6A5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GlyT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC6A5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlyT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC6A5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlyT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。