Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GlyR α2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402179-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GlyR α2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GlyR α2ダブルニカースプラスミド（h）およびGlyR α2ダブルニカースプラスミド（h2）は、GLRA2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GlyR α2 抗体 (C-11): sc-398964
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GlyR α2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402179-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GlyR α2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402179-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLRA2 は、Cys ループ受容体ファミリーに属するリガンド作動性塩化物チャネルであるグリシン受容体 α2（GlyR α2）サブユニットをコードしており、中枢神経系における迅速な抑制性神経伝達を担います。GlyR α2 は、シナプス性およびシナプス外のグリシン作動性シグナル伝達に寄与し、塩化物イオンのコンダクタンスを介して神経細胞の興奮性、ネットワークの同期、ならびに興奮と抑制のバランスを形成します。この受容体は、シナプス成熟や回路の精緻化などの神経発達過程にも関与し、その機能は抑制性シナプス伝達やイオン恒常性を制御する経路と交差します。グリシン作動性シグナル伝達の変化や、GLRA2 の配列変化または発現変動は、遺伝学的・機能的研究により神経発達表現型や発作関連／興奮性異常の疾患・病態と関連づけられており、機構解明を目的とした神経科学研究における重要性が示されています。
GlyR α2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GLRA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GLRA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GLRA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GLRA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。