GlyR α1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404734-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GlyR α1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GlyR α1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase GlyR α1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GLRA1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GlyR α1 Anticorpo (2E7): sc-293498
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GlyR α1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404734-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GlyR α1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404734-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLRA1 codifica a subunidade alfa 1 do recetor de glicina (GlyR α1), um canal de cloreto ativado por ligando que medeia a neurotransmissão inibitória rápida na medula espinal, no tronco encefálico e noutras regiões do SNC. Após a ligação da glicina, o GlyR α1 contribui para o influxo de cloreto e para a hiperpolarização da membrana, modulando a inibição sináptica e a excitabilidade dos circuitos motores. Este recetor participa na sinalização de canais iónicos ativados por neurotransmissores e na função de sinapses inibitórias, com efeitos a jusante sobre os limiares de disparo neuronal e a sincronização de redes. Variações genéticas ou disfunção em GLRA1 estão associadas a alterações do tónus inibitório e têm sido relacionadas com fenótipos de sobressalto/hiperplexia e anomalias neurofisiológicas associadas, relevantes para modelos de controlo motor e processamento sensorial.
GlyR α1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GLRA1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GLRA1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GLRA1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GLRA1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.