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glypican-4慢病毒激活颗粒(m2) | sc-420640-LAC-2 | 200 µl | $455.00 |
小鼠Gpc4编码糖脂酰磷脂酰肌醇(GPI)锚定的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖——glypican-4,该蛋白定位于细胞表面及细胞外基质,通过调控形态发生因子和生长因子的分布发挥作用。Glypican-4通过塑造配体–受体相互作用并建立影响增殖、分化与发育期组织模式形成的信号梯度,调节包括Wnt/β-连环蛋白、FGF和BMP在内的多条信号通路。Gpc4活性或表达的改变与细胞外信号调控失衡相关,并已在代谢稳态、脂肪组织生物学以及神经发育过程等研究情境中受到关注,因此与复杂性状遗传学研究具有相关性。在小鼠模型中对Gpc4进行基因编辑,有助于从机制层面解析依赖硫酸乙酰肝素的信号传导、细胞间通讯以及细胞外基质调控在发育和疾病相关表型中的作用。
glypican-4 慢病毒激活颗粒(m2)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Gpc4 表达。
glypican-4 慢病毒激活颗粒(m2)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Gpc4转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性glypican-4表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Gpc4 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。