glypican-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420640-ACT

O gene Gpc4 de camundongo codifica a glicipana-4, um proteoglicano de sulfato de heparano ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se localiza na superfície celular e na matriz extracelular, onde modula a disponibilidade de ligantes e a interação com receptores. A glicipana-4 molda gradientes de morfógenos e fatores de crescimento e pode influenciar vias de sinalização como Wnt/β-catenina, Hedgehog, FGF e BMP por meio de interações dependentes de sulfato de heparano. Por essas funções, Gpc4 contribui para o padrão de desenvolvimento, a remodelação tecidual e decisões de destino celular, e alterações na sinalização mediada por glicipanas têm sido associadas à proliferação e diferenciação desreguladas em contextos relevantes para doenças. Em modelos murinos, Gpc4 também é estudado em relação a fenótipos metabólicos e inflamatórios, incluindo a biologia do tecido adiposo e redes de sinalização responsivas à insulina.

glypican-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gpc4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

glypican-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gpc4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gpc4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de glypican-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gpc4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de glypican-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via glypican-4 em células tumorais com expressão de Gpc4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.