glycogen synthase 2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402704-NIC

GYS2はヒトのグリコーゲン合成酵素2（glycogen synthase 2）をコードしており、肝細胞においてUDP-グルコースからグルコースを既存のグリコーゲン・プライマーへ転移させることで、グリコーゲン鎖を伸長する主要アイソフォームです。その活性はリン酸化依存的な制御を介してインスリンや栄養シグナルを統合し、全身のグルコース利用可能性に応じた肝グリコーゲン貯蔵を協調的に調節します。GYS2は、グリコーゲン合成（glycogenesis）とグリコーゲン分解（glycogenolysis）のバランスをとる炭水化物代謝経路の中で機能し、摂食・絶食サイクルにおけるグルコース恒常性と密接に結びついています。GYS2依存的なグリコーゲン合成の制御異常は、肝グリコーゲンの異常な蓄積または枯渇を伴う代謝表現型と関連し、インスリン抵抗性やより広範な代謝疾患メカニズムの文脈でしばしば検討されます。

glycogen synthase 2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GYS2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GYS2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GYS2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GYS2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。