Glutathione Peroxidase 2/GPX2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406827-ACT

ヒトGPX2（グルタチオンペルオキシダーゼ2）は、セレン依存性の抗酸化酵素であり、グルタチオンを用いて過酸化水素および脂質ヒドロペルオキシドを還元し、上皮バリアにおけるレドックス恒常性の維持に寄与します。酸化損傷を抑えることで、GPX2はROS（活性酸素種）感受性のシグナル伝達に影響を及ぼし、NRF2によるストレス応答、炎症経路、ならびに増殖やアポトーシスに関する細胞の意思決定などに関与します。GPX2活性はグルタチオン代謝およびより広範な解毒プロセスと密接に結びついており、これらはミトコンドリア機能や膜脂質の完全性を規定します。GPX2発現の異常は、酸化ストレス表現型や炎症関連病態と関連づけられており、消化管生物学、上皮分化、腫瘍に伴うレドックス適応といった文脈でしばしば研究されています。

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Glutathione Peroxidase 2/GPX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlutathione Peroxidase 2/GPX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlutathione Peroxidase 2/GPX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。