Plásmido Doble Nickase (h) Glucosidase IIα: sc-407683-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Glucosidase IIα consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Glucosidase IIα (h) y el plásmido de doble nickasa Glucosidase IIα (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GANAB. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Glucosidase IIα Anticuerpo (D-1): sc-518226
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Glucosidase IIα | sc-407683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Glucosidase IIα | sc-407683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GANAB codifica la subunidad alfa de la glucosidasa II, una enzima residente del retículo endoplásmico (RE) que recorta de manera secuencial los residuos de glucosa de los N-glicanos unidos a proteínas en glicoproteínas nacientes. Este paso de desglucosilación es fundamental para el control de calidad del RE, ya que acopla el procesamiento de los glicanos al plegamiento asistido por calnexina/calreticulina y dirige las proteínas que permanecen mal plegadas hacia la degradación asociada al RE (ERAD). A través de estos procesos, GANAB influye en la proteostasis de la vía secretora, la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y la maduración de numerosas proteínas de membrana y secretadas. La alteración genética y funcional de GANAB se ha asociado con trastornos del procesamiento de glicoproteínas y se ha estudiado en el contexto de los mecanismos de la enfermedad poliquística renal y hepática, así como de fenotipos más amplios vinculados al estrés del RE.
Glucosidase IIα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GANAB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GANAB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GANAB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GANAB alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.