GLT6D1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-415678-ACT-2

O GLT6D1 humano (glycosyltransferase 6 domain containing 1) codifica uma glicosiltransferase putativa residente no complexo de Golgi, implicada na biossíntese e no remodelamento de glicoconjugados, influenciando assim a glicosilação de proteínas e a composição de carboidratos na superfície celular. Por meio de seus efeitos na maturação de glicanos, o GLT6D1 está em posição de modular o tráfego na via secretória, as interações com a matriz extracelular e processos de sinalização mediados por receptores que dependem de padrões específicos de glicosilação. Variações genéticas e alterações na regulação do GLT6D1 têm sido associadas, em estudos humanos, à suscetibilidade à doença periodontal, destacando sua relevância para interações hospedeiro–microrganismo e para o remodelamento inflamatório de tecidos na cavidade oral. Ferramentas de edição gênica e de genômica funcional aplicadas ao GLT6D1 permitem investigar fenótipos dependentes de glicosilação, incluindo alterações na adesão celular, na sinalização relacionada ao sistema imune e em perfis glicoproteômicos em modelos celulares relevantes para doenças.

GLT6D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GLT6D1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GLT6D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GLT6D1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GLT6D1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GLT6D1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GLT6D1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GLT6D1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GLT6D1 em células tumorais com expressão de GLT6D1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.