GLCNE Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424509-ACT

O gene **Gne** do camundongo codifica a **UDP-N-acetilglucosamina 2-epimerase/N-acetilmanosamina quinase (GLCNE)**, uma enzima bifuncional e limitante de velocidade na via biossintética *de novo* do ácido siálico, que converte UDP-GlcNAc em mannosamina-6-fosfato (ManNAc-6-fosfato). Ao controlar os níveis celulares de CMP–ácido siálico, a GLCNE influencia a sialilação de proteínas e lipídios, o que molda a maturação de glicoproteínas na via secretória e modula o reconhecimento célula–célula, a adesão e a sinalização de receptores na membrana plasmática. Alterações na atividade de **Gne** e na homeostase da sialilação estão associadas a defeitos na fisiologia muscular e a respostas de estresse mais amplas ligadas à glicosilação, que afetam a sinalização inflamatória e as interações com a matriz extracelular. Essas características biológicas tornam **Gne** um alvo útil para estudar, em sistemas modelo de camundongo, a regulação dependente de sialilação de proteínas de membrana, o tráfego intracelular e a composição de glicoconjugados.

GLCNE O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gne sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GLCNE O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gne em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gne, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GLCNE. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gne nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GLCNE no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GLCNE em células tumorais com expressão de Gne silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.