GIPC2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405087-ACT

GIPC2 (proteína que interage com GAIP, extremidade C-terminal 2) é um adaptador contendo domínio PDZ, implicado na organização de complexos de sinalização associados à membrana e na coordenação do tráfego de receptores. Por meio de interações proteína–proteína mediadas por PDZ, a GIPC2 pode influenciar a triagem endocítica, o transporte vesicular e a propagação de sinais a jusante, que moldam a polaridade celular, a migração e programas de controle do crescimento. Padrões de expressão alterados de adaptadores da família GIPC têm sido associados a circuitos de sinalização desregulados na biologia do câncer e em outros distúrbios que envolvem renovação anômala de receptores, sustentando a investigação da GIPC2 em estados transcricionais e fenotípicos dependentes do contexto. Estudar a regulação de GIPC2 ajuda a esclarecer como proteínas de scaffolding/acopladoras conectam a dinâmica de receptores de superfície a vias intracelulares que governam o comportamento celular.

GIPC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GIPC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GIPC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GIPC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GIPC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GIPC2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GIPC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GIPC2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GIPC2 em células tumorais com expressão de GIPC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.