GI24 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407831-ACT

VSIR codifica o recetor imunorregulador GI24 (também conhecido como VISTA), uma molécula de checkpoint da família B7 expressa predominantemente nos compartimentos hematopoiético e mieloide, que modula a ativação das células T e a tolerância periférica. O GI24 participa na sinalização da sinapse imunitária e em vias supressoras que moldam a produção de citocinas, a função das células apresentadoras de antigénio e os limiares inflamatórios nos microambientes tecidulares. A expressão desregulada de VSIR tem sido associada a fenótipos alterados de evasão imunitária e a padrões de infiltração imunitária no cancro, bem como a respostas inflamatórias aberrantes em contextos de doenças autoimunes e infecciosas. Como resultado, VSIR é frequentemente estudado em vias que regulam a exaustão das células T, a imunossupressão mediada por células mieloides e a comunicação cruzada entre tumor e sistema imunitário.

GI24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VSIR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GI24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VSIR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VSIR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GI24. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VSIR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GI24 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GI24 em células tumorais com expressão de VSIR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.