GHR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420549-ACT

O gene **Ghr** de camundongo codifica o receptor do hormônio do crescimento (GHR), um receptor de citocinas transmembranar que se liga ao hormônio do crescimento para regular o crescimento somático, o metabolismo e a homeostase tecidual. A ligação do ligante promove a dimerização do receptor e a ativação de JAK2, desencadeando a sinalização a jusante via STAT5, bem como a comunicação cruzada com as vias PI3K–AKT e MAPK/ERK, para controlar programas transcricionais relacionados à proliferação, diferenciação e utilização de nutrientes. A atividade do GHR modula a produção hepática de IGF-1 e influencia a fisiologia do tecido adiposo, muscular e ósseo, tornando-o central para a regulação endócrina do crescimento e do equilíbrio energético. A desregulação da sinalização do GHR tem sido associada a fenótipos de crescimento alterados e disfunção metabólica, sendo frequentemente estudada em contextos de biologia do desenvolvimento, envelhecimento e remodelamento de vias endócrinas.

GHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ghr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ghr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ghr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GHR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ghr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GHR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GHR em células tumorais com expressão de Ghr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.