Plásmido CRISPR de Activación (h) GH: sc-401112-ACT

El GH1 humano codifica la hormona del crecimiento (GH), una hormona peptídica derivada de la hipófisis que regula el crecimiento sistémico, la composición corporal y la homeostasis metabólica. La señalización de la GH activa el receptor de GH para poner en marcha programas transcripcionales mediados por JAK2/STAT5 e interactúa con las cascadas PI3K–AKT y MAPK, coordinando la actividad del eje IGF, la utilización de nutrientes y los procesos anabólicos en múltiples tejidos. La alteración de la expresión de GH1 o la desregulación de la vía de GH se asocia con trastornos del crecimiento y con fenotipos endocrino‑metabólicos más amplios, lo que convierte a GH1 en un nodo útil para estudiar la transcripción inducida por hormonas, el control por retroalimentación y las respuestas de señalización específicas de cada tejido. En modelos celulares, la GH puede influir en la proliferación, la diferenciación y las redes génicas de respuesta al estrés a través de vías downstream dependientes de STAT y relacionadas con IGF.

GH-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GH1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GH-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GH1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GH1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GH-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GH1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GH-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GH-1 en células tumorales con expresión de GH1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.