GGTase-IIβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406913

Panoramica

RABGGTB codifica la subunità beta della Rab geranilgeraniltransferasi (GGTasi-IIβ), un componente centrale dell’enzima eterodimerico che catalizza la geranilgeranilazione delle GTPasi Rab. Questa modificazione lipidica è essenziale per l’associazione delle Rab alle membrane e per le funzioni di traffico che regolano la gemmazione delle vescicole, lo smistamento endosomiale, le dinamiche di membrana legate all’autofagia e la secrezione regolata. Attraverso il suo impatto sulle vie di trasporto dipendenti dalle Rab, la GGTasi-IIβ influenza l’identità degli organelli e la compartimentalizzazione della segnalazione lungo l’intero sistema endomembranoso. La disregolazione della prenilazione delle Rab e del traffico vescicolare è stata collegata a neurodegenerazione, disfunzioni immunitarie e alterazioni del trasporto di membrana e del riciclo dei recettori associate al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GGTase-IIβ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RABGGTB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RABGGTB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RABGGTB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GGTase-IIβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RABGGTB per lo studio della segnalazione di GGTase-IIβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RABGGTB critici per la funzione di GGTase-IIβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RABGGTB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GGTase-IIβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GGTase-IIβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RABGGTB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GGTase-IIβ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GGTase-IIβ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RABGGTB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RABGGTB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.