GFRαL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415831-ACT

O GFRAL humano (GDNF family receptor alpha-like) codifica o GFRαL, um correceptor ancorado por GPI que confere especificidade de ligante à sinalização de RET em resposta ao GDF15. Esse complexo receptor é enriquecido em neurônios do rombencéfalo e conecta sinais extracelulares a cascatas de quinases intracelulares, como MAPK/ERK e PI3K/AKT, moldando a atividade neuronal e programas transcricionais envolvidos no balanço energético sistêmico. Alterações na atividade do eixo GDF15–GFRαL–RET têm sido associadas à desregulação metabólica e à biologia relacionada à caquexia, tornando o GFRAL um ponto de entrada útil para dissecar o controle neuroendócrino do apetite e a mudança de peso associada ao estresse. In vitro, a modulação da expressão de GFRAL dá suporte a estudos de tráfego do receptor, sinalização dependente de ligante e redes gênicas a jusante em modelos celulares neuronais relevantes ou células engenheiradas.

GFRαL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GFRAL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GFRαL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GFRAL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GFRAL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GFRαL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GFRAL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GFRαL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GFRαL em células tumorais com expressão de GFRAL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.