GFRα-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405061

概要

GFRA3は、ヒトのグリア細胞株由来神経栄養因子（GDNF）ファミリー受容体α-3（GFRα-3）をコードしています。GFRα-3はGPIアンカー型の共受容体で、神経栄養因子アルテミンおよび関連するGDNFファミリーリガンドに対するリガンド特異性を付与します。リガンドが結合すると、GFRα-3はRET受容体型チロシンキナーゼと協調して、MAPK/ERKやPI3K/AKTなどのシグナル伝達カスケードを活性化し、神経細胞の生存、分化、軸索誘導を制御します。GFRA3は末梢神経系の発生や神経—免疫相互作用の分野で広く研究されており、受容体—リガンドシグナルの変化が、感覚神経の機能や炎症性疼痛の処理に関わる機序と関連づけられています。さらに、GFRA3が関与するRET/GDNFファミリーのシグナル異常は、特定のがんモデルにおける腫瘍細胞シグナル伝達、浸潤、ならびに微小環境とのクロストークといった文脈でも検討されています。

GFRα-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGFRA3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GFRA3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GFRA3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GFRα-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GFRα-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GFRA3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GFRα-3の機能に不可欠なGFRA3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GFRA3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GFRα-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGFRα-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GFRA3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GFRα-3 HDRプラスミド（h）および GFRα-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGFRA3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGFRA3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。