GFRα-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420539

Visão geral

Gfra1 codifica o GFRα-1, um correceptor ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se liga ao fator neurotrófico derivado da linhagem de células gliais (GDNF) e o apresenta à tirosina-quinase RET para iniciar a sinalização a jusante. Esse complexo ligante–receptor regula a sobrevivência neuronal, o crescimento de neuritos e a diferenciação por meio de vias que incluem PI3K–AKT, MAPK/ERK e sinalização dependente de PLCγ, com funções adicionais em tecidos derivados da crista neural. Em camundongos, a atividade do GFRα-1 também está implicada na morfogênese renal e na manutenção de células-tronco espermatogoniais, refletindo seu papel mais amplo em programas de desenvolvimento e de homeostase tecidual. A desregulação da sinalização GDNF–GFRα-1–RET é amplamente usada como arcabouço mecanístico para estudar defeitos do neurodesenvolvimento, neurodegeneração e fenótipos celulares dirigidos por RET em modelos experimentais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GFRα-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Gfra1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Gfra1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Gfra1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GFRα-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Gfra1 para a investigação da sinalização de GFRα-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Gfra1 críticos para a função GFRα-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Gfra1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GFRα-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GFRα-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Gfra1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GFRα-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GFRα-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Gfra1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Gfra1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.