Plasmide Double Nickase (h) GFAT2: sc-406546-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GFAT2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GFAT2 Double Nickase (h) et le plasmide GFAT2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GFPT2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GFAT2 | sc-406546-NIC | 20 µg | $410.00 |
GFPT2 code la glutamine—fructose-6-phosphate amidotransférase 2 (GFAT2), enzyme limitante de la voie de biosynthèse des hexosamines, qui convertit le fructose-6-phosphate et la glutamine en glucosamine-6-phosphate. En contrôlant le flux vers la production d’UDP-GlcNAc, GFAT2 influence la N‑ et l’O‑GlcNAcylation des protéines, la réorientation de la glycolyse et les réponses de détection des nutriments reliant la disponibilité en glucose et en glutamine à la signalisation cellulaire. Une activité altérée de la voie des hexosamines a été associée à une reprogrammation métabolique, à la régulation de la matrice extracellulaire et à des programmes transcriptionnels adaptatifs au stress, pertinents pour des phénotypes cellulaires liés au diabète, la fibrose et la biologie tumorale. Dans les cellules humaines, GFPT2 constitue donc un nœud d’étude utile pour comprendre comment une régulation dépendante de la glycosylation affecte la prolifération, la différenciation et la signalisation inflammatoire.
GFAT2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GFPT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GFPT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GFPT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GFPT2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.