Gemin8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404145-ACT

GEMIN8 codifica a Gemin8, um componente central do complexo SMN–Gemin que dá suporte à montagem de pequenas ribonucleoproteínas nucleares spliceossomais (snRNPs), necessárias para o splicing do pré‑mRNA. Por meio de seu papel na biogênese de snRNPs e na homeostase do spliceossomo, a Gemin8 contribui para a fidelidade do processamento de RNA e para uma regulação mais ampla de programas de expressão gênica. Alterações na atividade do complexo SMN estão associadas a mecanismos de doenças neuromusculares e do neurodesenvolvimento e podem afetar a viabilidade celular e as respostas ao estresse por meio de mudanças no metabolismo de RNA. Assim, o GEMIN8 é relevante para o estudo de vias associadas ao spliceossomo, da montagem de complexos RNA‑proteína e da desregulação do transcriptoma relacionada a doenças em células humanas.

Gemin8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GEMIN8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gemin8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GEMIN8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GEMIN8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gemin8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GEMIN8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gemin8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gemin8 em células tumorais com expressão de GEMIN8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.