Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
GDF-11 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420524-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GDF-11 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- GDF-11 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal GDF-11 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal GDF-11 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Gdf11. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GDF-11 Antibody (X-19): sc-81952
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GDF-11 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-420524-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il fattore di differenziazione della crescita 11 (Gdf11) codifica GDF-11, un ligando secreto della superfamiglia del TGF-β che segnala attraverso i recettori di tipo II dell’activina e ALK4/5 per attivare programmi trascrizionali dipendenti da SMAD2/3. Nei tessuti murini, GDF-11 contribuisce al patterning embrionale e alla regolazione postnatale della dinamica delle cellule progenitrici, influenzando miogenesi, neurogenesi e sviluppo scheletrico tramite un controllo, dipendente dal contesto, della differenziazione e della proliferazione. Questa via di segnalazione interseca il rimodellamento della matrice extracellulare e la regolazione del ciclo cellulare, rendendo Gdf11 un nodo utile per studiare la tempistica dello sviluppo e l’omeostasi tissutale. Un’alterata segnalazione TGF-β/activina che coinvolge GDF-11 è stata esaminata in modelli di deperimento muscolare, fibrosi e declino funzionale associato all’età, a supporto di studi meccanicistici sull’equilibrio della segnalazione più che di un recupero fenotipico.
GDF-11 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gdf11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
GDF-11 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gdf11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gdf11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GDF-11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gdf11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GDF-11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GDF-11 nelle cellule tumorali con espressione di Gdf11 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.