GCN5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400767-ACT

ヒトKAT2AはGCN5をコードしており、GCN5はリシンアセチルトランスフェラーゼとしてヒストンH3（H3K9およびH3K14を含む）をアセチル化し、クロマチンの開放化と転写能の獲得を促進します。GCN5はSAGAやATACなどの多サブユニットからなる共活性化因子複合体の一部として機能し、ヒストンのアセチル化を転写の開始および伸長プログラムと連動させることで、細胞周期の進行、DNA損傷応答、系譜特異的な遺伝子発現の制御に関与します。ヒストンおよび非ヒストン基質のアセチル化を介して、KAT2Aはシグナル入力をクロマチンを基盤とする増殖・分化制御へと統合します。KAT2A/GCN5活性の変化とそれに伴うエピジェネティックな制御異常は、がん原性の転写ネットワークや、異常なクロマチンリモデリングに関連する他の疾患にも関与すると考えられています。

GCN5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KAT2Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GCN5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KAT2A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKAT2A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GCN5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKAT2A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGCN5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKAT2A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGCN5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。