GBP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402792-ACT

ヒトGBP3（グアニル酸結合タンパク質3）は、インターフェロン誘導性の大型GTPアーゼであり、抗菌応答や炎症応答を調節することで細胞内在性免疫を支える。GBP3はIFN-γ/STATシグナル伝達プログラムに関与し、病原体の制限に結び付く宿主防御経路、インフラマソーム隣接プロセス、ならびにサイトカイン駆動性の転写リモデリングに影響を及ぼし得る。GBP3の発現変化は免疫介在性疾患や複数のがんの文脈で報告されており、インターフェロン刺激遺伝子ネットワークおよび腫瘍—免疫相互作用との密接な関連を反映している。そのためGBP3は、インターフェロン応答性回路、自然免疫の活性化状態、そしてヒト細胞におけるストレス関連の転写表現型を解析するための有用なノードである。

GBP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GBP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GBP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GBP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGBP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GBP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGBP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGBP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGBP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGBP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。