GBE1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-428773-ACT

O gene **Gbe1** em camundongos codifica a enzima 1 de ramificação do glicogênio (**GBE1**), uma glicosiltransferase essencial que introduz pontos de ramificação **α-1,6** durante a biossíntese do glicogênio. Ao controlar a arquitetura do glicogênio, a GBE1 sustenta o armazenamento normal de glicose, a solubilidade do glicogênio e a mobilização eficiente em tecidos metabolicamente ativos, conectando-se a vias centrais do metabolismo de carboidratos e da homeostase energética. Alterações na ramificação do glicogênio modificam a estrutura das partículas de glicogênio e podem favorecer o acúmulo de polissacarídeos pouco ramificados, semelhantes à amilopectina, tornando o **Gbe1** um alvo relevante para estudar o controle de qualidade do glicogênio e respostas ao estresse metabólico. A atividade desregulada de GBE1 está associada a patologias de armazenamento de glicogênio e a fenótipos neuromusculares em sistemas modelo, o que apoia seu uso em estudos mecanísticos da biologia de doenças ligadas ao metabolismo do glicogênio.

GBE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gbe1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GBE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gbe1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gbe1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GBE1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gbe1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GBE1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GBE1 em células tumorais com expressão de Gbe1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.