Ganglioside sialidaseCRISPR激活质粒(h): sc-404848-ACT

NEU3 编码一种与人类质膜相关的神经节苷脂唾液酸苷酶，可从神经节苷脂及相关糖鞘脂上切除末端唾液酸，从而重塑细胞表面糖链组成。通过调控依赖神经节苷脂的膜微区，NEU3 能影响受体酪氨酸激酶信号传导、细胞黏附与迁移，以及对脂质–蛋白组织变化作出反应的下游 MAPK/PI3K 相关通路。唾液酸苷酶活性的改变会影响糖鞘脂代谢与炎症信号网络，使 NEU3 成为研究糖链重塑如何调控细胞通讯的一个有价值节点。在异常生长和组织重塑等背景下已有 NEU3 表达失调的报道，支持其在疾病相关信号机制与膜生物学研究中的重要性。

Ganglioside sialidase CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NEU3的表达。

Ganglioside sialidase CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NEU3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NEU3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Ganglioside sialidase表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NEU3位点，并能够研究内源性位点上依赖于Ganglioside sialidase的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NEU3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Ganglioside sialidase通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。