Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GALK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405217
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GALK1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GALK1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GALK1 Antibody (A-2): sc-393404
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GALK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405217 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GALK1 codifica la galattochinasi 1, un enzima citosolico che catalizza la fosforilazione dell’α-D-galattosio a galattosio-1-fosfato, avviando il flusso attraverso la via di Leloir per l’utilizzo del galattosio. Controllando l’ingresso del galattosio nelle vie della glicolisi e della biosintesi dei glicoconiugati, l’attività di GALK1 contribuisce al metabolismo energetico cellulare e all’omeostasi dei glicani. L’alterazione della gestione del galattosio è associata a errori congeniti del metabolismo e una funzione modificata della via di Leloir può influenzare le risposte allo stress ossidativo e la tossicità dei metaboliti in diversi contesti cellulari. GALK1 è quindi rilevante per lo studio del metabolismo dei carboidrati, della riprogrammazione metabolica e degli effetti a valle sulla glicosilazione di proteine e lipidi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GALK1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GALK1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GALK1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GALK1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GALK1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GALK1 per lo studio della segnalazione di GALK1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GALK1 critici per la funzione di GALK1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GALK1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GALK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GALK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GALK1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GALK1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GALK1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GALK1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GALK1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.