Plasmide CRISPR d'Activation (m) galectin-9: sc-421420-ACT

Le gène murin Lgals9 code la galectine‑9, une lectine se liant aux β‑galactosides qui régule les interactions cellule‑cellule et cellule‑matrice via une reconnaissance dépendante des glycannes des glycoconjugués de surface et de la matrice extracellulaire. La galectine‑9 contribue à la signalisation immunitaire et à la régulation de l’inflammation en modulant l’activation des leucocytes, les programmes de cytokines et le trafic tissulaire, avec des effets en aval sur des voies liées à la biologie des checkpoints immunitaires et à la transcription induite par le stress. Elle influence également l’adhésion, la migration et l’apoptose, des processus qui façonnent les interactions tumeur‑immunité et les microenvironnements inflammatoires chroniques. Une expression dérégulée de LGALS9/galectine‑9 a été associée à l’auto‑immunité, à l’immunopathologie des maladies infectieuses et à la biologie des cancers, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études en immunologie et sur le microenvironnement.

galectin-9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Lgals9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

galectin-9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Lgals9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Lgals9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de galectin-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Lgals9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de galectin-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie galectin-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de Lgals9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.