GABA_A Rθ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406766

Visão geral

O GABRQ codifica a subunidade θ (teta) do receptor GABA\(_A\), um canal de cloreto pentamérico, ativado por ligante, que medeia a neurotransmissão inibitória rápida no sistema nervoso central humano. Ao regular o influxo de cloreto e a hiperpolarização da membrana, os receptores GABA\(_A\) modulam a excitabilidade neuronal, a integração sináptica e as oscilações de rede, além de interagirem funcionalmente com vias que controlam a dinâmica do cálcio, a liberação de neurotransmissores e a expressão gênica dependente de atividade. Variações no tônus inibitório envolvendo subunidades específicas do receptor estão associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos e podem influenciar a suscetibilidade a disfunções de circuitos relacionadas a convulsões e ao estresse. A composição de subunidades, o tráfego celular e a farmacologia do receptor são determinantes-chave da função das sinapses inibitórias, tornando o GABRQ um alvo útil para dissecar mecanismos de sinalização GABAérgica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GABAA Rθ (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GABRQ em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GABRQ, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GABRQ na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GABAA Rθ.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GABRQ para a investigação da sinalização de GABAA Rθ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GABRQ críticos para a função GABAA Rθ
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GABRQ para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GABAA Rθ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GABAA Rθ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GABRQ. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GABAA Rθ Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GABAA Rθ (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GABRQ para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GABRQ definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.