GABA_A Rπ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404623

Descripción general

GABRP codifica la subunidad π del receptor humano GABA\(_A\), un canal de cloruro activado por ligando que media la neurotransmisión inhibitoria y modula la excitabilidad de la membrana. La incorporación de la subunidad π puede modular el ensamblaje del receptor, la conductancia iónica y las propiedades farmacológicas, influyendo así en la señalización sináptica y en la actividad subsiguiente de las redes neuronales. La señalización del receptor GABA\(_A\) se integra con vías dependientes de calcio, el desarrollo neuronal y la regulación homeostática del equilibrio entre excitación e inhibición. Las alteraciones en la expresión o la regulación de GABRP se han investigado en el contexto de la biología de enfermedades neuropsiquiátricas y neurológicas, así como en estudios de señalización en células epiteliales, donde componentes gabaérgicos pueden afectar programas de proliferación y diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GABAA Rπ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GABRP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GABRP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GABRP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GABAA Rπ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GABRP para la investigación de la señalización de GABAA Rπ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GABRP críticos para la función de GABAA Rπ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GABRP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GABAA Rπ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GABAA Rπ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GABRP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GABAA Rπ (h) y el plásmido HDR GABAA Rπ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GABRP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GABRP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.